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普諾賽4月直播答疑：常見(jiàn)細(xì)胞污染類(lèi)型及解決方法

在4月28日開(kāi)播的“常見(jiàn)細(xì)胞污染類(lèi)型及解決方法”課程中，有很多老師就細(xì)胞污染提出了疑問(wèn)。我們篩選出部分代表性問(wèn)題，并作了詳細(xì)解答。01Q：在細(xì)胞培養(yǎng)液中，有種可以游動(dòng)的蟲(chóng)子是什么污染？A：是細(xì)菌污染。帶鞭毛的細(xì)菌就是會(huì)游動(dòng)的。02Q：有很多黑點(diǎn)，在原位顫抖，沒(méi)那么明顯的定向運(yùn)動(dòng)，是什么污染？A：細(xì)胞碎片、血清沉淀和有些細(xì)菌污染，都會(huì)在原位顫抖。前者是原地做不規(guī)律的布朗運(yùn)動(dòng)，細(xì)菌是原地轉(zhuǎn)動(dòng)，頻率會(huì)高很多。03Q：血清的絮狀物雜質(zhì)屬于正?，F(xiàn)象嗎？A：血清里面有一些大分子蛋白和一些...

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SH-SY5Y收貨常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

常溫運(yùn)輸過(guò)程中，細(xì)胞不免受到震蕩和溫度變化的影響，出現(xiàn)皺縮、聚團(tuán)甚至脫落的現(xiàn)象。遇到這種情況，不用緊張，只要正確處理，細(xì)胞就能恢復(fù)正常生長(zhǎng)。收貨時(shí)皺縮常溫細(xì)胞收貨后，把細(xì)胞放進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)即可。如果4小時(shí)后細(xì)胞仍然沒(méi)有鋪展開(kāi)，密度適中的前提下可以靜置過(guò)夜（過(guò)夜前倒出部分培養(yǎng)基，留5-10mL在瓶中，瓶蓋擰松）。收貨時(shí)聚團(tuán)常溫細(xì)胞收貨后，先把細(xì)胞放進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)以穩(wěn)定狀態(tài)，再進(jìn)行傳代。傳代用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1-3min左右。收貨時(shí)脫落常...

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細(xì)胞培養(yǎng)中常見(jiàn)細(xì)胞污染類(lèi)型及預(yù)防辦法

凡混入細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中對(duì)細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物都應(yīng)視為污染，細(xì)胞污染不能*被消除，但能減少其發(fā)生的頻率和后果的嚴(yán)重性。本文將簡(jiǎn)要介紹幾種常見(jiàn)的細(xì)胞污染類(lèi)型及處理方法。常見(jiàn)污染類(lèi)型細(xì)菌污染特征：大小在0.5~5μm，比動(dòng)物細(xì)胞小很多。多呈球狀或桿狀，形態(tài)規(guī)則，分布均勻；增殖速度快，一般污染后48~72小時(shí)爆發(fā)式增殖；營(yíng)養(yǎng)消耗快，培養(yǎng)基很快變黃，變渾濁；鏡下觀察有明顯的定向運(yùn)動(dòng)。處理方法：輕度污染可用10X雙抗清洗處理，重度污染建議消殺后丟棄。真菌污染特征：呈鏈球狀...

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大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)和傳代流程

體外培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞細(xì)胞周期有限；建議使用與procell配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基和正確的操作方法進(jìn)行培養(yǎng)，以保證細(xì)胞處于理想培養(yǎng)狀態(tài)。procell實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞采用胰蛋白酶消化、神經(jīng)元特異性培養(yǎng)基培養(yǎng)、篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制制備。細(xì)胞總數(shù)約為5×105個(gè)細(xì)胞/瓶。大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)和傳代流程（請(qǐng)嚴(yán)格按照無(wú)菌操作）：1、從原培養(yǎng)瓶中吸出培養(yǎng)基，用PBS緩沖液潤(rùn)濕細(xì)胞兩次，加入2-3ml025%胰蛋白酶消化細(xì)胞（注意消化時(shí)間，一般控制在1-2min內(nèi)）；2...

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收到293 [HEK-293]細(xì)胞后如何操作？

293[HEK-293]細(xì)胞是剪切過(guò)的人腺病毒5(Ad5)轉(zhuǎn)染的人胚腎細(xì)胞形成的永生化細(xì)胞，293[HEK-293]細(xì)胞包含并表達(dá)轉(zhuǎn)染的Ad5基因。早期報(bào)道中指出，293[HEK-293]細(xì)胞基因組中含有腺病毒5(Ad5)基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA，但是現(xiàn)在明確了只存在其左側(cè)端的DNA。經(jīng)過(guò)對(duì)Ad5的插入點(diǎn)的克隆測(cè)序發(fā)現(xiàn)，Ad5的1-4344位線性核苷酸整合入293[HEK-293]細(xì)胞19號(hào)染色體(19q13.2)。293[HEK-293]細(xì)胞為人類(lèi)腺病毒載體擴(kuò)增的宿主...

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直播答疑 | 普諾賽3月直播：細(xì)胞系由來(lái)及鑒定問(wèn)題

在普諾賽3月30日開(kāi)播的細(xì)胞培養(yǎng)直播課堂中，有很多同學(xué)提出各種疑問(wèn)。我們篩選出具有代表性的問(wèn)題，并作了詳細(xì)解答。01動(dòng)物細(xì)胞怎么鑒定？要根據(jù)實(shí)驗(yàn)的目的以及細(xì)胞類(lèi)型進(jìn)行選擇。如果是人源細(xì)胞系，并且有文獻(xiàn)或數(shù)據(jù)庫(kù)公布對(duì)應(yīng)細(xì)胞信息，則進(jìn)行STR鑒定即可；如果使非人源的細(xì)胞系，可以進(jìn)行種屬鑒定，并且附加一個(gè)研究方向相關(guān)的指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證，部分小鼠細(xì)胞也可以做STR鑒定，但目前數(shù)據(jù)庫(kù)不*，很多都沒(méi)有匹配數(shù)據(jù)。對(duì)于原代細(xì)胞，如果能夠確保取材無(wú)誤，僅進(jìn)行特異性指標(biāo)方面的檢測(cè)就可以了，方法可采用...

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胎牛血清的儲(chǔ)存和使用都是有講究的

胎牛血清是實(shí)驗(yàn)室常用的天然培養(yǎng)基，但不能直接使用。無(wú)論是存儲(chǔ)還是使用，都比較復(fù)雜。血清的常規(guī)處理是熱鈍化，即置于56°水浴中30分鐘；其目的是使血清中的補(bǔ)體成分和一些未知的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制分子失活。實(shí)驗(yàn)表明，大多數(shù)細(xì)胞不需要經(jīng)過(guò)正確處理后的熱滅活血清。經(jīng)過(guò)這樣的處理，血清只能輕微促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)，或者根本沒(méi)有作用。即使是高溫處理通常也會(huì)影響血清的質(zhì)量并降低細(xì)胞的生長(zhǎng)速度。熱處理過(guò)的血清會(huì)顯著增加沉淀物的形成。在倒置顯微鏡下觀察時(shí)，這些沉淀物，如“小黑點(diǎn)”，常常使研究人員誤認(rèn)為血清被...

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雞卵泡顆粒細(xì)胞分離、培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟

雞卵泡顆粒細(xì)胞分離、培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟：A.翅下靜脈注射2mLEDTA-2Na(W/V，2%)溶液處死母雞，新潔爾滅消毒液浸泡消毒5min，打開(kāi)腹腔，剪取整個(gè)卵巢，小心剝離卵泡(以8-15g為最佳)，置于裝有PBS緩沖液的無(wú)菌培養(yǎng)皿中；B.用加有雙抗的PBS緩沖液沖去血污，漂洗3次；將漂洗干凈的卵泡移入裝有預(yù)冷PBS緩沖液的平皿中，剝凈卵泡外膜、結(jié)締組織及血管網(wǎng)；C.用手術(shù)刀在卵泡表面劃一道1-2cm長(zhǎng)的切口(動(dòng)作要快)，釋放卵黃，用PBS緩沖液將剩余的卵黃液漂洗干凈，剩下的卵泡膜...

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